胰岛淀粉样变（Islet Amyloidosis）是2型糖尿病（T2DM）的重要病理特征，通常伴随着胰岛β细胞的丢失和功能衰退。然而，由于缺乏适合的动物模型，限制了对胰岛淀粉样变形成机制及其在糖尿病进展中作用的研究。本文详细介绍一种通过部分胰腺切除、激素干预和抗高血糖药物治疗，成功诱导猫胰岛淀粉样变的实验模型的建立方法。

一、实验动物选择与术前准备

1. 实验动物的选择
   • 使用8只健康的去势雄性短毛家猫，体重范围为4.2–5.6 kg，年龄为24–29个月。
   • 实验前，确认所有动物的血糖耐受性正常，无胰岛淀粉样变，且体检结果（血常规、生化分析、尿液分析）正常。
2. 术前准备
   • 禁食12小时以减少术中风险。
   • 动物安置在单独的不锈钢笼中，提供标准猫粮和自由饮水，维持正常代谢状态。

二、手术操作：部分胰腺切除

1. 目标
   • 通过移除部分胰腺（脾叶），减少胰岛β细胞总量，为糖尿病的诱导创造条件。
2. 手术过程
   • 在全身麻醉下（异氟烷吸入麻醉），进行腹部开腹手术。
   • 精细分离胰腺脾叶及相关血管，避免损伤其他器官。
   • 移除胰腺脾叶并保留其他胰腺组织以维持部分内分泌和外分泌功能。
   • 术后将切下的胰腺组织进行固定和切片检查，确保无胰岛淀粉样变或其他病理改变。
3. 术后恢复
   • 猫术后恢复两个月，给予充足护理和监测，确保切除手术的成功并避免感染。

三、糖尿病诱导

1. 激素干预
   • 激素用药：每天皮下注射1 mg牛生长激素，同时口服1.5 mg地塞米松。
   • 目标：诱导胰岛素抵抗并造成血糖调节异常，逐步进入糖尿病状态。
   • 时间：经过约4个月的持续激素干预，所有猫均表现出持续性高血糖，表明糖尿病状态已稳定。
2. 治疗前观察期
   • 停止激素干预后，观察3周，确保糖尿病状态稳定并排除外界干扰因素。

四、抗高血糖药物干预

1. 实验分组
   • 稳定糖尿病状态后，随机将猫分为两组：
     • 格列吡嗪组：口服格列吡嗪（5 mg），每天2–3次。
     • 胰岛素组：皮下注射中效胰岛素（1.5单位/kg），每天2次。
   • 治疗持续18个月，以评估不同治疗方法对胰岛淀粉样变的影响。
2. 血糖与IAPP监测
   • 每周测量空腹血糖，并定期进行糖化血红蛋白（gHb）检测，评估血糖控制效果。
   • 每8周进行静脉葡萄糖耐量试验（IVGTT），测定胰岛素和胰岛淀粉样多肽（IAPP）的基础水平和刺激后的分泌量。

五、组织学与病理学分析

1. 胰腺取样
   • 实验结束后，通过静脉注射戊巴比妥对猫实施安乐死。
   • 收集胰腺组织，包括治疗期间未涉及的胰腺区域。
2. 组织处理与染色
   • 胰腺组织固定于10%中性缓冲甲醛溶液中，随后转移至70%乙醇中。
   • 进行常规石蜡包埋，切片厚度为4 μm。
   • 使用Congo红染色观察淀粉样变，并在偏光显微镜下检查典型的绿色双折射现象。
   • 采用胰岛淀粉样多肽（IAPP）的免疫组化染色，明确淀粉样物质的来源。
3. 评分与统计
   • 根据胰岛淀粉样变的范围和严重程度，将病变程度分为0–4级：
     • 0级：无病变；
     • 1级：轻微病变（<10%胰岛受影响）；
     • 4级：严重病变（>50%胰岛受影响）。
   • 计算每张切片中含有淀粉样沉积物的胰岛百分比。

六、实验结果与应用

1. 胰岛淀粉样变的形成
   • 格列吡嗪组的所有猫（4/4）均出现明显的胰岛淀粉样变，其中50%以上的胰岛受影响。
   • 胰岛素组仅1只猫（1/4）出现轻微的淀粉样变。
2. IAPP分泌与病变的相关性
   • 格列吡嗪组猫的IAPP水平显著高于胰岛素组，提示IAPP分泌增加可能是胰岛淀粉样变的关键因素。
3. 研究意义
   • 该模型首次成功在猫中诱导胰岛淀粉样变，为研究2型糖尿病及其相关病理提供了重要工具。
   • 结果支持“胰岛β细胞过度工作假说”，为相关药物研究和糖尿病治疗策略提供了科学依据。

参考文献：

Hoenig, Margarethe, Gregory Hall, Duncan Ferguson, Katherine Jordan, Michael Henson, Kenneth Johnson, and Timothy O’Brien. “A feline model of experimentally induced islet amyloidosis.” The American journal of pathology 157, no. 6 (2000): 2143-2150.